摘要
对全省2021年食源性疾病主动监测腹泻病例中分离的164株沙门菌采用玻片凝集法进行血清学分型，采用微量肉汤稀释法测定菌株对14种抗生素的最小抑菌浓度（MIC）值，采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行分子分型。
164株沙门菌可分为25种血清型，优势血清型为鼠伤寒沙门菌（76，46.34%）、肠炎沙门菌（25，15.24%）和爪哇安纳沙门菌（15，9.15%）。164株沙门菌耐药率为100%，多重耐药率达86.59%；其中对氨苄西林、四环素和萘啶酸耐药率较高，分别为95.12%（156/164）、78.05%（128/164）和63.41%（104/164）。72株鼠伤寒沙门菌PFGE聚类分析后共分为58种指纹图谱，24株肠炎沙门菌有12种指纹图谱，15株爪哇安纳沙门菌有3种指纹图谱。
沙门菌（Salmonella spp.）是一种常见的人畜共患病原
贵州省是沙门菌感染的高发省
2021年贵州省9个市州共17家食源性疾病监测哨点医院中，2 310份食源性病例腹泻患者粪便样本分离的164株沙门菌。食源性疾病腹泻病例定义为：由食品或怀疑食品引起的，以腹泻症状为主诉的感染病例，腹泻指每日排便3次或以上且粪便性状异常（如稀便、水样便、粘脓便或脓血便等）。
VITEK 2 compact全自动微生物鉴别及药敏分析系统（法国生物梅里埃公司）、MALDI TOF MS基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（德国布鲁克公司）、Thermo Vizion 全自动微生物药敏分析系统（美国 ThermoFisher 公司）；Chef Mapper脉冲场凝胶电泳仪和Gel Doc 2000凝胶成像系统（美国Bio-Rad公司）。
Swarm琼脂和沙门菌诊断血清试剂（丹麦Statens Serum Instit公司），革兰阴性需氧菌药敏检测板（美国 ThermoFisher公司），限制性内切酶XbaⅠ（美国NEB公司）。所用试剂均经质控验收，并在有效期内使用。
根据临床与实验室标准化协会（CLSI）文件M100-S29、M45-A3以及EUCAST推荐的药敏试验抗生素选择原则以及《2021年食源性疾病监测工作手册》确定抗生素种类，采用微量肉汤稀释法进行药敏试验，测定受试菌株对10类别14种抗生素的耐药情况。多重耐药株指对３类及以上抗生素同时耐药的菌株。
参照《2021年国家食源性疾病监测工作手册》对164株沙门菌进行PFGE分子分型，用DNA限制性内切酶XbaⅠ对沙门菌进行酶切，参考菌株为Salmonella Branderup 血清型全球参考菌株H9812。
采用Bionumerics（Version 7.2）数据库软件（pplied Maths BVBA，Belium）对PFGE指纹图谱进行分析。图像通过统一的 Marker（H9812）进行校准，标定条带位置。聚类方法使用非加权配对算术平均法（Unweighted pairgroup average method，UPGMA），相似度系数采用Dice，条带位置的差异容许度（Tolerance）和优化值（Optimization）均设置为1.5%，根据《国家食源性疾病监测工作手册》的要求，PFGE带型完全一致（100%）为同一谱型。
164株沙门菌经生化及质谱同时复核，结果全部为沙门菌，分为25种血清型，优势血清型分别为鼠伤寒沙门菌（76株，46.34%）、肠炎沙门菌（25株，15.24%）、爪哇安纳沙门菌（15株，9.15%）。76株鼠伤寒沙门菌经血清凝集后有22株菌（28.94%）H二相不凝集，是否为鼠伤寒沙门菌单相株须作进一步的分子生物学鉴定。详见
| 菌株名称 | 血清群 | 菌株数量/株 | 所占百分比/% |
|---|---|---|---|
| 鼠伤寒沙门菌 | B | 76 | 46.34 |
| 肠炎沙门菌 | D | 25 | 15.24 |
| 爪哇安纳沙门菌 | D | 15 | 9.15 |
| 利齐菲尔德沙门菌 | C2 | 7 | 4.27 |
| 都柏林沙门菌 | D | 6 | 3.66 |
| 拉古什沙门菌 | B | 5 | 3.05 |
| 德尔卑沙门菌 | B | 5 | 3.05 |
| 里森沙门菌 | C1 | 4 | 2.44 |
| 其他沙门菌* | — | 21 | — |
注： “*”其他血清型沙门菌菌株数均≤3，包括：病牛沙门菌（3）、伊鲁木沙门菌（2）、伦敦沙门菌（2）、婴儿沙门菌（1）、猪伤寒沙门菌（1）等
164株沙门菌药敏试验结果耐药率为100%，对各种抗生素耐药率介于10.98%～95.12%，其中对氨苄西林耐药率最高（95.12%），其次为四环素（78.05%）、萘啶酸（63.41%）、甲氧苄啶/磺胺甲𫫇唑（61.59%），未发现碳青霉烯类药物（亚胺培南）耐药株，详见
| 抗生素种类别 | 抗生素 | 全称/缩写 | 耐药MIC值/（µg/mL） | 敏感菌株数/株 | 中介菌株数/株 | 耐药菌株数/株 | 耐药率/% |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 青霉素类 | 氨苄西林 | Ampicillin(AMP) | ≥32 | 8 | 0 | 156 | 95.12 |
| β-内酰胺/β-内酰胺抑制剂复合物类 | 氨苄西林/舒巴坦 | Ampicillin/Sulbactam(AMS) | ≥32/16 | 32 | 75 | 57 | 34.76 |
| 头孢类（一代） | 头孢唑啉 | Cefazolin(CFZ) | ≥8 | 67 | 21 | 70 | 42.68 |
| 头孢类（三代） | 头孢噻肟 | Cefotaxime(CTX) | ≥4 | 105 | 1 | 58 | 35.37 |
| 头孢类（二代） | 头孢西丁 | Cefoxitin(CFX) | ≥32 | 140 | 18 | 6 | 3.66 |
| 头孢类（三代） | 头孢他啶 | Ceftazidime(CAZ) | ≥16 | 6 | 117 | 41 | 25.00 |
| 碳青霉烯类 | 亚胺培南 | Imipenem(IPM) | ≥4 | 164 | 0 | 0 | 0.00 |
| 氨基糖苷类 | 庆大霉素 | Gentamicin(GEN) | ≥16 | 118 | 11 | 35 | 21.34 |
| 大环内酯类 | 阿奇霉素 | Azithromycin(AZM) | ≥32 | 145 | 0 | 19 | 11.59 |
| 四环素类 | 四环素 | Tetracycline(TET) | ≥16 | 36 | 0 | 128 | 78.05 |
| 喹诺酮类和氟喹诺酮类 | 萘啶酸 | Nalidixicacid(NAL) | ≥32 | 60 | 0 | 104 | 63.41 |
| 环丙沙星 | Ciprofloxacin(CIP) | ≥1 | 27 | 89 | 48 | 29.27 | |
| 苯丙醇类 | 氯霉素 | Chloramphenicol(CHL) | ≥32 | 57 | 7 | 100 | 60.98 |
| 叶酸途径抑制剂类 | 甲氧苄啶/磺胺甲𫫇唑 | Trimethoprim/Sulfamethoxazole(SXT) | ≥4/76 | 63 | 0 | 101 | 61.59 |
164株沙门菌中多重耐药株达86.59%（142/164），共产生89种耐药谱，主要耐青霉素类、四环素类、（氟）喹诺酮类、部分头孢类抗生素。多重耐药血清型别主要涉及B群、C群、D群、E1群。在142株多重沙门菌中，以耐3种抗生素耐药菌株相对较多，占21.83%（31/142）；有10株菌对12种以上抗生素耐药，最高可对9类13种药物同时耐受。详见
| 耐药情况 | 耐药抗生素种类及数量 | 总数 | 占比/% | 血清群 | 血清型 |
|---|---|---|---|---|---|
| 耐0种 | — | 0 | 0 | — | — |
| 耐1种 |
AMP（3） TET（3） | 6 | 3.66 | B | 鼠伤寒沙门菌、拉古什沙门菌 |
| 耐2种 |
AM P-TET（6） AMP-NAL（8） NAL-CIP（2） | 16 | 9.76 | A、B、C2、D | 鼠伤寒沙门菌、拉古什沙门菌、利齐菲尔德沙门菌、都柏林沙门菌、爪哇安纳沙门菌、肠炎沙门菌 |
| 耐3种 |
AMP-TET-SXT（1） AMP-TET-NAL（10） AMP-TET-CHL（2） AMP-TET-CAZ（1） AMP-NAL-AMS（11） AMP-NAL-SXT（6） | 31 | 18.90 | B、C1、C2、D | 鼠伤寒沙门菌、都柏林沙门菌、肠炎沙门菌、爪哇安纳沙门菌、德尔卑沙门菌、里森沙门菌 |
| 耐4种 |
AMP-TET-SXT-CHL（13） AMP-TET-NAL-CHL（1） AMP-SXT-CHL-AMS（1） | 15 | 8.54 | B、C1、C2、D | 鼠伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、名古屋沙门菌、伊斯特本沙门菌、利齐菲尔德沙门菌、爪哇安纳沙门菌 |
| 耐5种 |
AMP-TET-SXT-CHL-GEN（1） AMP-TET-SXT-CHL-CIP（2） AMP-TET-SXT-CHL-CFZ（3） AMP-TET-NAL-SXT-CIP（1） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CIP（3） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-AMS（2） AMP-TET-NAL-SXT-CHL（2） AMP-TET-NAL-CHL-CFZ（1） AMP-TET-CHL-GEN-AZM（1） AMP-TET-CHL-CFZ-CTX（1） AMP-TET-CHL-CFZ-CIP（4） | 21 | 12.80 | B、C1、C2、D | 鼠伤寒沙门菌、利齐菲尔德沙门菌、病牛沙门菌、德尔卑沙门菌、肠炎沙门菌、爪哇安纳沙门菌、维尔肖沙门菌、婴儿沙门菌群、伦敦沙门菌、伊鲁木沙门菌 |
| 耐6种 |
AMP-TET-SXT-CHL-CIP-GEN（1） AMP-TET-SXT-CFZ-CTX-AMS（1） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CIP-GEN（1） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ（1） AMP-TET-NAL-SXT-CFZ-CAZ（1） AMP-TET-NAL-CHL-CFZ-CTX（1） AMP-NAL-CFZ-CTX-AMS-CAZ（1） AMP-CFZ-CTX-AMS-CAZ-CFX（1） | 8 | 4.88 | B、C1、D、E1 | 鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、德尔卑沙门菌、伦敦沙门菌、奥斯陆沙门菌 |
| 耐7种 |
AMP-TET-SXT-CHL-CFZ-CTX-CIP（1） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CIP（2） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-AMS（2） AMP-TET-NAL-SXT-CFZ-CTX-GEN（2） AMP-TET-NAL-CHL-CFZ-CTX-GEN（1） AMP-TET-NAL-CHL-CFZ-AMS-CAZ（1） | 9 | 5.49 | B | 鼠伤寒沙门菌、拉古什沙门菌、斯坦利沙门菌 |
| 耐8种 |
AMP-TET-SXT-CHL-CFZ-CTX-CAZ-GEN（1） AMP-TET-SXT-CHL-CFZ-CTX-AMS-CAZ（1） AMP-TET-SXT-CFZ-CTX-CAZ-GEN-AZM（2） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CIP-GEN-AZM（1） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CTX-AMS（1） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CIP-AZM（1） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-AMS-CIP（2） AMP-TET-NAL-CHL-CFZ-AMS-CIP-GEN（2） AMP-TET-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-GEN（1） AMP-TET-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-CAZ（2） | 14 | 8.54 | B、C1、C2、D | 鼠伤寒沙门菌、拉古什沙门菌、里森沙门菌、德尔卑沙门菌、都柏林沙门菌、病牛沙门菌 |
| 耐9种 |
AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CTX-AMS-GEN（2） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP（1） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP（2） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CTP-CAZ-AZM（1） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CIP-GEN-AZM（1） AMP-TET-NAL-SXT-CFZ-CTX-CIP-CAZ-AZM（1） AMP-TET-NAL-SXT-CFZ-CTX-AMS-AZM-CFX（2） AMP-TET-NAL-CHL-CTX-CIP-CAZ -CFX（1） AMP-TET-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-CAZ-GEN（2） AMP-TET-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-CAZ-GEN（2） | 15 | 9.15 | B、C1、D、E1 | 鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、朗吉维尔德沙门菌、拉古什沙门菌、爪哇安纳沙门菌、新斯托夫沙门菌、都柏林沙门菌 |
| 耐10种 |
AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-GEN（2） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-CFX（1） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-CAZ（3） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CTX-AMS-CAZ-GEN（1） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CTX-AMS-CAZ-CFX（3） AMP-TET-NAL-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-CAZ-CFX（1） AMP-TET-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-CAZ-CAZ-CFX（2） | 13 | 7.93 | B、C1、C2、D | 鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、爪哇安纳沙门菌、病牛沙门菌、利齐菲尔德沙门菌、里森沙门菌 |
| 耐11种 |
AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-CAZ-GEN（3） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-CAZ-CFX（1） AMP-TET-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-CAZ-CAZ-GEN-AZM（1） AMP-TET-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-CAZ-CAZ-AZM-CFX（1） | 6 | 3.66 | B、C1、C2、D | 鼠伤寒沙门菌、纽波特沙门菌、利齐菲尔德沙门菌、都柏林沙门菌、猪伤寒沙门菌 |
| 耐12种 |
AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-CAZ-GEN-AZM（3） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-CAZ-AZM-CFX（1） AMP-TET-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-CAZ-CAZ-GEN-AZM-CFX（2）AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-CAZ-GEN-CFX（1） AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-CAZ-GEN-AZM（1） | 8 | 4.88 | B、C2 | 鼠伤寒沙门菌、利齐菲尔德沙门菌、病牛沙门菌 |
| 耐13种 | AMP-TET-NAL-SXT-CHL-CFZ-CTX-AMS-CIP-CAZ-GEN-AZM-CFX（2） | 2 | 1.22 | B | 鼠伤寒沙门菌 |
分离的鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、爪哇安纳沙门菌等三种优势血清型沙门菌均呈现多重耐药现象，多重耐药率分别为：90.79%（69/76），84.00%（21/25）和73.33%（11/15），其中鼠伤寒沙门菌对氨苄西林（96.05%）、四环素（95.05%）、氯霉素（71.05%）耐药率较高，肠炎沙门菌对氨苄西林（96.00%）、萘啶酸（96.00%）、多黏菌素E（68.00%）耐药率较高，爪哇安纳沙门菌对氨苄西林（100%）全部耐药，对萘啶酸（93.33%）、头孢唑林（46.67%）等抗生素耐药率较高。三种优势血清型沙门菌多重耐药率之间差异无统计学意义（
图1 三种优势血清型沙门菌对14种抗生素耐药率比较
Figure 1 Comparison of resistance rates of three dominant serotypes of salmonella to 14 kinds of antibiotics
注： AMP: 氨苄西林、TET: 四环素、NAL: 萘啶酸、SXT: 甲氧苄啶/磺胺甲𫫇唑、CHL: 氯霉素、CFZ: 头孢唑啉、CTX: 头孢噻肟、AMS: 氨苄西林/舒巴坦、CIP: 环丙沙星、CAZ: 头孢他啶、GEN: 庆大霉素、AZM: 阿奇霉素、CFX: 头孢西丁、IPM: 亚胺培南
164株沙门菌来自于全省9个市州腹泻患者，各市州分离株数量在8~36株，全年均有检出，高峰期为5~10月，占全年检出的84.15%（138/164）。各市州分离的沙门菌多重耐药率在54.44%~100%，其中六盘水市和遵义市分离的菌株多重耐药率高达100%。各市、州沙门菌多重耐药率之间差异有统计学意义（
| 地区 | 分离菌株数 | 所占百分比/% | 血清群 | 血清型 | 多重耐药率/% |
|---|---|---|---|---|---|
| 安顺市 | 11 | 6.71% | B、C2、D | 鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、阿贡纳沙门菌、拉古什沙门菌、利齐菲尔德沙门菌 | 81.82 |
| 毕节市 | 11 | 6.71% | A、B、D、E1 | 鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、甲型副伤寒沙门菌、伦敦沙门菌 | 54.55 |
| 贵阳市 | 33 | 20.12% | B、C1、C2、D | 鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、病牛沙门菌、德尔卑沙门菌、拉古什沙门菌、朗吉维尔德沙门菌、里森沙门菌、名古屋沙门菌 | 84.85 |
| 六盘水市 | 17 | 10.37% | B、C1、C2、D | 鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、病牛沙门菌、拉古什沙门菌、奥斯陆沙门菌、都柏林沙门菌 | 100.00 |
| 黔东南州 | 8 | 4.88% | B、C2、D、E1、E4 | 鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、德尔卑沙门菌、利齐菲尔德沙门菌、山夫登堡沙门菌、伦敦沙门菌 | 62.50 |
| 黔南州 | 23 | 14.02% | B、C1、C2、D | 鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、病牛沙门菌、德尔卑沙门菌、里森沙门菌、维尔肖沙门菌 | 86.96 |
| 黔西南州 | 19 | 11.59% | D | 肠炎沙门菌、爪哇安纳沙门菌 | 73.68 |
| 铜仁市 | 36 | 21.95% | B、C1、C2、D、E1 | 鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、都柏林沙门菌、伊鲁木沙门菌、德尔卑沙门菌、猪伤寒沙门菌、利齐菲尔德沙门菌、伊斯特本沙门菌、新斯托夫沙门菌、拉古什沙门菌 | 88.89 |
| 遵义市 | 6 | 3.66% | B、C2 | 鼠伤寒沙门菌、斯坦利沙门菌、纽波特沙门菌 | 100.00 |
| 合计 | 164 | 100.00% | — | — |
164株腹泻患者沙门菌分离株用Xba Ⅰ酶切后经PFGE分型，有6株沙门菌DNA降解，共得到156株有效的PFGE指纹图谱。对三种优势血清型别菌株进行聚类分析。
76株鼠伤寒沙门菌条带相似度为54.3%~100%，图谱差异较大，含有59种不同的指纹图谱，分别命名为S1-S58，有成簇带型，其中S32型包含5株菌，S35、S41型包含3株菌，S4、S26、S40、S42和S52型各包含2株菌，剩余带型均含1株菌（
图2 鼠伤寒沙门菌PFGE指纹图谱聚类分析图（n=72）
Figure 2 Cluster analysis of PFGE fingerprint of Salmonella typhimurium（n=72）
24株肠炎沙门菌条带相似度为38.9%~100%，含有12种不同的指纹图谱。其中S3型包含9株菌，S12型包含3株菌，S1和S11型各包含2株菌，其余带型均包含1株菌（
图3 肠炎沙门菌PFGE指纹图谱聚类分析图（n=24）
Figure 3 Cluster analysis of PFGE fingerprint of Salmonella enteritidis （n=24）
15株爪哇安纳沙门菌条带相似度为59.3%~100%，含有3种不同的指纹图谱，其中S1型包括13株菌，S2和S3型各包含1株菌（
图4 爪哇安纳沙门菌PFGE指纹图谱聚类分析图（n=15）
Figure 4 Clustering analysis of PFGE fingerprint of Salmonella javiana
优势血清型别以外的45株沙门菌，经聚类分析后相似度47.3%~100%，图谱差异较大，呈多样性。仅少数菌株间具有相同的PFGE带型，且最多包含2株菌，未发现绝对优势带型。将所有菌株的带型与耐药谱并列观察后，各带型与耐药谱间未见明显关联。
贵州省食源性疾病监测结果显示，2021年引起我省食源性疾病的致病病原以沙门菌检出最高，占比51.73%（164/317，数据未发表），说明沙门菌感染性腹泻是我省食源性疾病腹泻感染的主要类型。检出的沙门菌包含25种血清型，优势血清型为鼠伤寒沙门菌（46.34%）、肠炎沙门菌（15.24%）、爪哇安纳沙门菌（9.15%）及利齐菲尔德沙门菌（4.27%），位列第一、二的优势血清型与我国其他地区人源沙门菌的主要血清型相
耐药结果分析显示，我省食源性沙门菌对青霉素氨苄西林（青霉素类）普遍耐药，耐药率高达95.12%，对四环素类达78.05%，对萘啶酸、氯霉素和甲氧苄啶/磺胺甲𫫇唑耐药率也达60%以上，与其他地区文献报道一
结果表明，我省沙门菌临床株多重耐药现象普遍，多重耐药率达86.59%，有10株菌耐12种抗生素以上，出现耐13种的多重耐药株，提示省内腹泻沙门菌分离株的多重耐药形势严峻。耐药率高于国内如杭州市69.03
PFGE指纹图谱聚类分析结果显示，我省食源性沙门菌条带呈现分散多样性，表现出较大的遗传多样性，提示菌株可能具有广泛的来源，提示存在沙门菌食物中毒散发的可能，同时也有来源于不同的市州的部分菌株带型聚集呈蔟，相似度为100%，可能是紧密相关的菌株，提示存在交叉感染的可能，或许与食品的流通有关。鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌的图谱聚类分析发现，这两种血清型的菌株PFGE型别分散、带型复杂，提示该两类血清型沙门菌感染较分散，防控难度较大。而爪哇安纳沙门菌图谱呈现较高的同源性，15株爪哇安纳沙门菌全部来自同一个市州，未在其他地区检出，提示可能为同一污染源引起的食源性聚集病例。爪哇安纳沙门菌是近年省内食源性疾病主动监测中首次发现的血清型，提示在持续监测中关注该类血清型沙门菌的感染。
研究显示，相同的PFGE带型可能包含不同耐药谱，而不同PFGE带型的耐药谱也可能相同，两者间未见明显相关性，与以往报道一
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