出血性大肠埃希菌O157:H7可视化和实时荧光RPA检测方法的比较
作者:
作者单位:

1.青岛国际旅行卫生保健中心,山东 青岛 266000;2.中华人民共和国黄岛海关口岸监管处, 山东 青岛 266000

作者简介:

徐颖 女 硕士研究生 研究方向为病原检测和微生物学检测 E-mail:261660636@qq.com

通讯作者:

滕新栋 男 副主任医师 研究方向为媒介鉴定和病原检测 E-mail:17853278290@139.com

中图分类号:

R155

基金项目:

山东省重点研发计划(2021CXCG011306)


Visualization and real-time fluorescence RPA detection methods for enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7
Author:
Affiliation:

1.Qingdao International Travel Health Care Center, Shandong Qingdao 266000, China;2.Huangdao Customs Port Administration of the People’s Republic of China, Shandong Qingdao 266000, China

Fund Project:

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    摘要:

    目的 以检测出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7为目的,基于重组酶聚合酶扩增(RPA)技术,分别建立可视化RPA检测方法和实时荧光RPA检测方法。方法 根据出血性大肠埃希菌O157:H7的rfbE基因设计引物和探针,进行特异性、灵敏度检测,建立实时荧光RPA检测方法。结合SYBR Green I在核酸反应中的颜色变化特征,设计可视化RPA检测方法。结果 建立的实时荧光RPA检测方法和可视化RPA检测方法,分别在35 ℃时反应不超过25 min即可检测EHEC O157:H7。设计的引物和探针仅对EHEC O157:H7出现特异性结果。两种检测方法的检测限低于10-5 ng/μL。结论 EHEC O157:H7的可视化RPA检测方法和实时荧光RPA检测方法操作简便,且特异性强、敏感性高,可为EHEC O157:H7的现场快速检测和实验室检测提供新方法。

    Abstract:

    Objective To detect enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) O157:H7, visualization recombinant enzyme polymerase amplification (RPA) detection and real-time fluorescence RPA detection methods were established based on RPA technology.Methods Primers and probes were designed based on the rfbE gene of EHEC O157:H7, and specificity and sensitivity were determined. A real-time fluorescent RPA method was established. Combined with the color change characteristics of SYBR Green I in nucleic acid reactions, a visualization RPA method for the detection of EHEC O157:H7 was established.Results The established real-time fluorescence RPA detection and visual RPA detection methods both detected EHEC O157:H7 in 25 min at a reaction temperature of 35 ℃. The designed primers and probes showed specific results only for EHEC O157:H7. The detection limits of the two methods were lower than 10-5 ng/μL.Conclusion The visual RPA detection and real-time fluorescence RPA detection methods of EHEC O157:H7 were easy to operate with strong specificity and high sensitivity. This study provides novel methods for the rapid detection of EHEC O157:H7 in the field and laboratory.

    参考文献
    相似文献
    引证文献
引用本文

徐颖,庄国栋,王丽丽,滕新栋.出血性大肠埃希菌O157:H7可视化和实时荧光RPA检测方法的比较[J].中国食品卫生杂志,2024,36(1):26-31.

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  • 收稿日期:2022-11-14
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  • 在线发布日期: 2024-04-09
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