多重PCR-变性高效液相色谱快速检测单核细胞增生李斯特菌毒力基因方法的建立
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钱云开 男 工程师 研究方向为食品生物安全 E-mail:qyk-1@163.com通讯作者:┣┣(中)通信作者┫┫王海洋 男 工程师 研究方向为食品生物安全 E-mail:why9601@163.com

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Development of a multiplex PCR-DHPLC method for the rapid detection of enterotoxins genes in food-borne Listeria monocytogenes
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    摘要:

    建立单增李斯特菌的多个靶基因快速检测手段,提高检测的准确性。方法 根据单增李斯特菌4个毒力基因(hly、prfA、inlA、inlB)设计引物,通过优化引物浓度和引物组合,进行多重PCR扩增,产物经变性高效液相色谱(DHPLC)进行快速检测。结果 出峰顺序依次为inlB、hly、inlA、prfA,扩增片段大小为146、210、255、388bp,此方法具有良好的特异性,灵敏度可达到280cfu/ml。结论 本方法可以满足实际工作中食品微生物检测的要求。

    Abstract:

    To establish a quick checking method of enterotoxins genes in food-borne Listeria monocytogenes by multiplex polymerase chain reaction (MPCR) and denaturing high-performance liquid chromatography (DHPLC).MethodsPrimers for detection of hly, prfA, inlA and inlB were designed and PCR system was optimized. Products were detected by DHPLC for quick detection. Thirty-two strains were tested with PCR method, sensitivity was determined with various concentration of standard strains. ResultsThe peak order of PCR products was inlB, hly, inlA, prfA, and amplified fragment size was 146,0, 255and 388bp respectively. This method has good specificity, and the lowest amount of detecting was 280cfu/ml.ConclusionThis method can well meet the requirements of actual food microbe testing.

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引用本文

钱云开,王海洋,肖艳霞,高飞,李琳,张会敏,吴曦,张进杰.多重PCR-变性高效液相色谱快速检测单核细胞增生李斯特菌毒力基因方法的建立[J].中国食品卫生杂志,2014,26(2):141-145.

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  • 收稿日期:2013-09-13
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  • 在线发布日期: 2014-04-16
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