使用环介导等温扩增技术快速检测食品中肠出血性大肠杆菌O157:H7的初步研究
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主管医师 研究方向为病原微生物诊断 E-mail: yihaihua88@ 126. com

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江苏出入境检验检疫局科研专项基金项目(2007KJ29)


Rapid Detection of Enterohemorrhagic Escherichia coli O157∶H7 in Food by Loop-Mediated Isothermal Amplification Assay
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    摘要:

    目的 探索建立一种快速的、简单的食品中肠出血性大肠杆菌O157∶H7的检测方法。方法针对编码O157: H7脂多糖的rfbE 基因(GenBank S83460)和编码H7鞭毛抗原的fliC 基因(GenBank L07388)特征性保守序列,利用环介导等温扩增(1oop-mediated isothermal amplification, LAMP)核酸扩增基因技术,对21株O157∶H7和非O157∶H7菌株进行特异性检测,并与聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法进行比较。同时使用部分食品样品对LAMP法检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7的实际运用价值进行评估。结果 LAMP法可以在1 h内完成检测工作。LAMP法检测出血性大肠杆菌O157∶H7的灵敏度为96.72%,特异度为85.71%,准确性为93.26%。LAMP检测技术的灵敏度较PCR技术高。结论 LAMP是一种简单、快速的检测技术,适用于筛选可疑大肠杆菌O157∶H7样本。

    Abstract:

    Objective To develop a rapid and simple method of loop-mediated isothermal amplification (LAMP) for detecting Escherichia coli O157∶H7 in foods. Methods Based on the characteristic conserved sequence of lipopolysaccharide gene (rfbE, GenBank S83460) of O157 antigen and flagellin gene (fliC, GenBank L07388) of H7 antigen, the 1oop-mediated isothermal amplification method was developed to detect the specificity of twenty-one E Coli O157∶H7 strains and non E Coli O157∶H7 strains. The results of LAMP were compared with PCR. The feasibility of LAMP was evaluated by detecting Escherichia coli O157:H7 in food samples. Results The detection could be finished by LAMP within 1 hour; the sensitivity was 96.72%, the specificity was 85.71% and the accuracy was 93.26%. The sensitivity of LAMP was higher than that of PCR. Conclusion LAMP is a simple, rapid method suitable for screening Escherichia coli O157:H7 in suspicious samples.

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引用本文

易海华,赵金伟,徐波,吴萍兰,宋阳威,房超,徐政,徐继承.使用环介导等温扩增技术快速检测食品中肠出血性大肠杆菌O157:H7的初步研究[J].中国食品卫生杂志,2010,22(3):206-213.

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  • 收稿日期:2009-06-18
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