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河南省市售食品中沙门菌污染状况、血清型、耐药性和分子分型研究  PDF

  • 崔莹
  • 张广伟
  • 王钰
  • 戚浩彧
  • 邱正勇
  • 张濛
  • 李辉
  • 李永利
  • 刁琳琪
河南省疾病预防控制中心,河南省食品安全风险监测医学重点实验室,河南省食源性疾病病原溯源重点实验室,河南 郑州 450016

中图分类号: R155

最近更新:2024-11-13

DOI:10.13590/j.cjfh.2024.08.007

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摘要

目的

了解2021年河南省市售食品中沙门菌污染状况、血清型、耐药性和分子分型特征。

方法

参照2021年度《国家食品污染物和有害因素风险监测工作手册》,在河南省内36个监测点采集市售食品,对采集的食品样品开展沙门菌检测。

结果

共采集市售食品样本2 074份,总检出率为1.40%(29/2 074)。各食品类别中,肉及肉制品检出率最高(6.21%,20/322)。各采样环节中,农贸市场中沙门菌检出率最高(2.61%,11/421)。所有沙门菌均在散装样品中检出,预包装样品中无检出。冬春季(0.83%,3/360)与夏秋季(1.52%,26/1 714)食品中检出率差异无统计学意义(χ2=1.008,P>0.05)。检出的30株沙门菌分属于7个群,鉴定为20种不同血清型,B群占比最多(43.33%,13/30),其中占比较高的血清型别为阿贡纳沙门菌10.00%(3/30)和德尔卑沙门菌10.00%(3/30)。76.67%的沙门菌均出现不同程度耐药,70.00%的沙门菌为多重耐药,有4株菌对10种及10种以上抗生素耐药,占所有耐药株的17.39%,最高出现了对13种抗生素耐药。30株沙门菌共产生29种PFGE带型,相似度为49.5%~100.0%,PFGE图谱100%相似的菌株仅有两株。

结论

河南省市售食品中沙门菌污染率较高,且耐药性比较严重,出现了大比例的多重耐药情况,但无明显优势耐药谱。河南省沙门菌血清型别呈多态性,不存在明显优势血清型。PFGE带型呈现多样性,没有明显的优势带型,说明河南省食源性沙门菌存在高度散发的流行特征。

近年来,食品安全问题因关系全民健康和国计民生成为全球关注的重要问题。食源性疾病是引发食品安全事件的主要因素。沙门菌属于肠杆菌科沙门菌属,革兰氏阴性短小杆菌,在食品中分布广

1-3,是引起食源性疾病的主要病原菌之一,其主要通过污染食品、水等感染人类,症状主要表现为急性肠胃4。国内外报道过多例沙门菌引起的食源性疾病的暴发案5-7。沙门菌引起的食源性疾病在微生物性食源性疾病中占比高达70%~80%,每年造成全球约1.15亿人感染和37万人死8。因此,加强食品中沙门菌监测对预防食源性疾病具有重要意义。本研究对2021年河南省市售食品开展沙门菌的监测,对检测出的沙门菌菌株进行血清学分型、药物敏感性试验和脉冲场凝胶电泳(Pulsed field gel electrophoresis,PFGE)分子分型等实验。以了解河南省市售食品中沙门菌的污染情况及其血清型、耐药性和分子分型等特征,保障我省食品安全、预防食源性疾病的发生,并为食品监管部门加强防控措施提供科学参考和依据。

1 材料和方法

1.1 样本来源

按照随机采样的原则,从河南省18个地市和18个县(市、区)共采集2 074份食品样品。采样地点涵盖流通和餐饮服务的各个环节。样品采集后立即低温保存(4 ℃~8 ℃),尽快送达实验室开展检测。

1.2 检验项目及方法

1.2.1 病原菌分离鉴定

参照2021年度《国家食品污染物和有害因素风险监测工作手册》,依据《GB 4789.4—2016食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验》对采集的食品样品开展沙门氏菌定性检测。

1.2.2 药物敏感性试验

参照2021年度《国家食源性疾病监测工作手册》中革兰氏阴性菌药敏试验标准操作程序,采用微量肉汤稀释法对沙门氏菌株进行最低抑菌浓度(Minimal inhibit concentration,MIC)测定,所用药物为:氨苄西林(Ampicillin,AMP)、氨苄西林/舒巴坦(Ampicillin - sulbactam,AMS)、甲氧苄啶/磺胺甲𫫇唑(Trimethoprim sulfamethoxazole,SXT)、四环素(Tetracycline,TET)、氯霉素(Chloramphenicol,CHL)、头孢唑啉(Cefazolin,CFZ)、环丙沙星(Ciprofloxacin,CIP)、头孢他啶(Ceftazidime,CAZ)、亚胺培南(Imipenem,IPM)、萘啶酸(Nalidixic acid,NAL)、头孢西丁(Cefoxitinv,CFX)、头孢噻肟(Cefotaxime,CTX)、多黏菌素E(Colisitin,CT)、庆大霉素(Gentamicin,GEN)、阿奇霉素(Azithromycin,AZM)。药敏试验以大肠埃希菌ATCC25922作为质控菌株。对3类或3类以上抗生素耐药的菌株判定为多重耐药。

1.2.3 PFGE实验

按照2021年度《国家食源性疾病监测工作手册》中沙门氏菌PFGE标准操作程序进行操作,采用XbaⅠ限制性内切酶对实验菌株进行酶切。选用沙门氏菌标准菌株H9812作为分子质量标记。PFGE图谱用Bio Numerics 7.6软件进行聚类分析。

1.3 质量控制

为保证检测结果的准确性和稳定性,各监测点对每一批次培养基、试剂进行严格质控,经验证合格后在有效期内使用。由河南省疾病预防控制中心复核确认各监测点的疑似菌株并对检出的沙门菌进行血清学分型。药敏试验及PFGE均由河南省疾病预防控制中心统一提供标准菌株进行质量控制。

1.4 统计学分析

采用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析,利用χ2检验对监测数据进行比较,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同类型食品中沙门氏菌检出情况

本次共采集市售食品样本2 074份,包含9个食品类型,总检出率为1.40%(29/2 074)。其中检出率最高的食品类型为肉及肉制品,为6.21%(20/322)。20份阳性肉及肉制品包括18份生畜肉(14份猪肉、2份牛肉及2份羊肉)和2份熟肉制品(1份为鸭肉,1份为猪肉),不同类型食品阳性率见表1。20份阳性的肉及肉制品有19份来自流通环节、1份来自餐饮环节;8份阳性的餐饮食品有4份来自流通环节、4份来自餐饮环节;1份阳性的蔬菜及其制品来自流通环节。

表1  不同类型食品中沙门菌检出率
Table 1  Detection rate of Salmonella in different food sources
食品类型样品份数阳性份数检出率(%)
餐饮食品 547 8 1.46
肉及肉制品 322 20 6.21
饮料 185 0 0
水果及其制品 110 0 0
蔬菜及其制品 267 1 0.37
食用菌 112 0 0
冷冻饮品(冰淇淋、雪糕等) 110 0 0
坚果与籽类及其加工制品类 102 0 0
蛋及蛋制品 319 0 0
总计 2 074 29 1.40

2.2 不同采样地点类型中沙门菌检出情况

采样地点类型分布在餐饮服务和流通的各个环节,农贸市场中沙门菌检出率最高(2.61%,11/421),其次为快餐店(包括餐饮配送公司)(1.75%,2/114)、网店(1.70%,3/176)和路边摊位(1.59%,1/63)。不同采样地点类型食品中沙门菌检出情况见表2

表2  不同采样地点类型食品中沙门菌检出率
Table 2  Detection rates of Salmonella in food from different sampling sites
采样地点类型样品份数阳性份数检出率(%)
餐饮服务环节 饭店/酒店 71 1 1.41
集体食堂 127 0 0
街头摊点 132 2 1.52
快餐店(包括餐饮配送公司) 114 2 1.75
小吃店 138 0 0
饮品店 10 0 0
流通环节 百货商场 26 0 0
便利店/零售店 216 1 0.46
超市 527 8 1.52
零售加工店(前销售后制作) 33 0 0
路边摊位 63 1 1.59
农贸市场 421 11 2.61
网店 176 3 1.70
批发市场 20 0 0

餐饮服务环节检出的5份阳性样本中包含1份肉及肉制品和4份餐饮食品;流通环节检出的24份阳性样本中包含19份肉及肉制品、4份餐饮食品和1份蔬菜及其制品。

2.3 不同包装类型食品中沙门菌检出情况

散装食品中沙门菌检出率为1.72%(29/1 688),预包装食品中未检出沙门菌(0/386)。

2.4 不同季节食品中沙门菌检出情况

冬春季(1~5月,11~12月)食品中沙门菌检出率为0.83%(3/360),夏秋季(6~10月)食品中检出率为1.52%(26/1 714),两者差异无统计学意义(χ2=1.008,P>0.05)。冬春季检出的3份阳性样本包括2份肉及肉制品,采自流通环节;1份餐饮食品,采自餐饮服务环节。夏秋季检出的26份阳性样本包括18份肉及肉制品,17份采自流通环节、1份采自餐饮服务环节;7份餐饮食品,4份采自流通环节、3份采自餐饮服务环节;1份蔬菜及其制品,采自流通环节。

2.5 沙门菌血清学分型

29份沙门菌阳性样本中共检出30株沙门菌,其中有一份样本中检出了2种不同血清型菌株。30株沙门菌分别属于7个群,鉴定为20种不同血清型。B群和C1群占比较多,分别为13株和6株。占比较高的血清型别为B群的阿贡纳沙门菌10.00%(3/30)和德尔卑沙门菌10.00%(3/30)。30株沙门菌血清型的类别和分布见表3

表3  30株沙门菌血清型分布情况
Table 3  Distribution of serotypes of 30 Salmonella strains
血清型菌株数(n百分比/%
B群_鼠伤寒沙门菌(S.Typhimurium 1 3.33
B群_鼠伤寒沙门菌变种(S.Typhimurium 2 6.67
B群_拉古什沙门菌(S.Lagos 1 3.33
B群_德尔卑沙门菌(S.Derby 3 10.00
B群_阿贡纳沙门菌(S.Agona 3 10.00
B群_斯坦利沙门菌(S.Stanley 1 3.33
B群_多哥沙门菌(S.Togo 2 6.67
C1群_阿富拉沙门菌(S.Afula 1 3.33
C1群_里森沙门菌(S.Rissen 2 6.67
C1群_利文斯通(S.Livingstone 1 3.33
C1群_汤卜逊沙门菌(S.Thompson 1 3.33
C1群_布伦登卢普沙门菌(S.Braenderup 1 3.33
C2群_黄金海岸沙门菌(S.Goldcoast 1 3.33
C3群_肯塔基沙门菌(S.Kentucky 1 3.33
E1群_伦敦沙门菌(S.London 1 3.33
E1群_列克星敦沙门菌(S.Lexington 1 3.33
E1群_沙门菌(S.Ⅱ 3,10:l,v:e,n,x 1 3.33
E1群_鸭沙门菌(S.Anatum 1 3.33
E4群_山夫登堡沙门菌(S.Senftenberg 2 6.67
F群_威尼斯沙门菌(S.Veneziana 1 3.33
未分型 2 6.67

2.6 沙门菌耐药性

2.6.1 耐药试验结果

采用MIC法对检出的30株沙门菌进行15种抗生素的药物敏感性试验。有76.67%(23/30)的沙门菌均为耐药株,其中对氨苄西林、四环素、氯霉素均为高耐药,耐药率分别为:66.67%、63.33%、63.33%,而对亚胺培南则100.00%敏感。沙门菌耐药情况见表4

表4  30株沙门菌药物敏感试验结果
Table 4  Results of drug susceptibility test of 30 strains of Salmonella
抗生素类别抗生素名称耐药株数中介株数耐药率/%
青霉素类 氨苄西林(AMP) 20 1 66.67
β-内酰胺/β-内酰胺抑制剂复合物 氨苄西林/舒巴坦(AMS) 9 11 30.00
头孢类 头孢唑啉(CFZ) 11 8 36.67
头孢噻肟(CTX) 7 0 23.33
头孢西丁(CFX) 2 6 6.67
头孢他啶(CAZ) 6 1 20.00
碳青霉烯类 亚胺培南(IPM) 0 0 0
氨基糖苷类 庆大霉素(GEN) 8 0 26.67
乳菌肽脂肽类 多黏菌素E(CT) 2 0 6.67
大环内酯类 阿奇霉素(AZM) 7 0 23.33
四环素类 四环素(TET) 19 0 63.33
喹诺酮类 萘啶酸(NAL) 10 0 33.33
和氟喹诺酮类 环丙沙星(CIP) 10 10 33.33
苯丙醇类 氯霉素(CHL) 19 0 63.33
叶酸途径抑制剂 甲氧苄啶/磺胺甲𫫇唑(SXT) 15 0 50.00

2.6.2 耐药谱特征

多重耐药分析显示,70.00%(21/30)的菌株为多重耐药,其中,对3~4类抗生素耐药的有7株、对5~9类抗生素耐药的有10株、对10~13类抗生素耐药的有4株。最多对13种抗生素均耐药,仅对亚胺培南和多黏菌素E两种抗生素敏感。23株菌共产生19种耐药谱,无明显优势耐药谱。沙门菌多重耐药谱分布情况见表5

表5  沙门菌多重耐药谱
Table 5  Multidrug resistance spectrum of Salmonella
耐药情况耐药谱菌株数(n占比/%
无耐药 7 23.33
耐1种 AMP 1 3.33
NAL 1 3.33
耐3种 CHL-TET-AMP 2 6.67
CHL-AMP-SXT 1 3.33
CHL-TET-SXT 1 3.33
耐4种 CHL-TET-AMP-SXT 2 6.67
NAL-AMP-AMS-CFZ 1 3.33
耐5种 TET-AMP-AMS-CFZ-SXT 1 3.33
CHL-GEN-TET-AMP-AMS 1 3.33
耐6种 CHL-TET-AMP-AMS-CFZ-SXT 1 3.33
CIP-CHL-NAL-TET-AMP-SXT 1 3.33
耐7种 CIP-CHL-NAL-TET-AMP-CFZ-SXT 1 3.33
CIP-CHL-GEN-TET-AMP-AZM-SXT 1 3.33
耐8种 CHL-NAL-TET-CTX-CAZ-CFZ-SXT-CT 1 3.33
CIP-CHL-NAL-GEN-TET-AMP-AMS-SXT 1 3.33
耐9种 CIP-CHL-GEN-TET-CTX-AMP-CAZ-CFZ-AZM 2 6.67
耐12种 CIP-CHL-NAL-GEN-TET-CTX-AMP-AMS-CAZ-CFZ-AZM-SXT 2 6.67
CIP-CHL-NAL-TET-CTX-CFX-AMP-AMS-CFZ-AZM-SXT-CT 1 3.33
耐13种 CIP-CHL-NAL-GEN-TET-CTX-CFX-AMP-AMS-CAZ-CFZ-AZM-SXT 1 3.33

2.7 PFGE分型结果

30株沙门菌用限制性内切酶XbaⅠ酶切进行PFGE分子分型,用Bio Numerics 7.6软件对电泳图谱进行聚类分析,得到29种带型,各带型之间相似度为49.5%~100.0%。PFGE图谱100%相似的菌株仅有两株。30株沙门菌脉冲场凝胶电泳聚类分析图谱见图1

图1  30株沙门菌脉冲场凝胶电泳聚类分析图谱

Figure 1  Cluster analysis of 30 Salmonella strains by pulsed field gel electrophoresis

3 讨论

沙门菌是最重要的食源性致病菌之一。在我国,沙门菌是引起细菌性食物中毒病例数最多的食源性致病

9-13,其传播对国内的食品安全有巨大的压力。本研究对2021年河南省市售的各类共计2 074份食品样本进行了沙门菌检测,总检出率为1.40%。高于2011—2018年吉林省内总体污染率0.56%14,低于2003—2010年山东省沙门菌检出率2.88%15和2016年江苏省沙门菌阳性检出率3.29%16

各食品类型中检出率最高的为肉及肉制品,检出率为6.21%。随着人民生活水平的不断提高,肉及肉制品已经成为人们日常摄入蛋白质的主要来源,但此类食品在宰杀、加工、运输、存储过程中极易被沙门菌污染从而导致食物中毒的发生,因此应长期对肉及肉制品进行沙门菌监测,以有效地预防食源性疾病的暴发。同时,相关部门应提醒人民群众在食用这类食品时,注意食品卫生,加热彻底并生熟分开,避免出现交叉污染。

本次监测结果表明在餐饮服务和流通的各个环节中,农贸市场、快餐店和网店沙门菌检出率最高,说明这3类场所是我省沙门菌污染的高发区。原因可能是因为这类场所从业人员卫生健康意识普遍较薄弱,销售过程中食品缺乏必要的防护,对食品储存环境控制不当等问题。此3类场所可能是河南省发生食品中沙门菌污染和传播的主要场所,应对此类场所的加工、流通、储存等环节加强监督。

在我国,引起食物中毒的沙门菌最常见的血清型别主要为鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌和德尔卑沙门菌

17。在云南省检出的沙门菌以德尔卑沙门菌为主,在贵州省检出的沙门菌以鼠伤寒和斯坦利沙门菌为18-20。这表明不同地区的食品中检出的沙门菌优势血清型别分布上可能存在一定差异。据世界卫生组织全球沙门菌监测网数据分析显示:引起食源性疾病的沙门菌最常见血清型别一般以肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌较为多21。本研究中检出的30株沙门菌血清学分型分别属于7个群,鉴定为20种不同血清型,没有明显优势血清型。这说明河南省沙门菌型别呈多态性,优势血清型菌株不明显存在,这对研究我省沙门菌型流行趋势变化有一定指导意义。

河南省食源性沙门菌耐药性比较严重,出现了大比例的多重耐药情况,在选用的15种抗生素中,有4株对10种及10种以上抗生素耐药,占所有耐药株的17.39%,最高出现了对13种抗生素耐药,但没有发现明显优势耐药谱。吴玲玲

22对2017—2021年河南省肉与肉制品中沙门菌的耐药特征展开分析,耐3类及3类以上抗生素的沙门菌株占比73.96%(71/96),对氨苄西林耐药率最高,为71.88%(69/96),其次为萘啶酸63.54%(61/96)和四环素58.33%(56/96)。本研究中耐3类及3类以上抗生素的菌株占比70.00%(21/30),与上述研究中的差异无统计学意义(χ2=0.420,P>0.05);本研究中氨苄西林的耐药率为66.67%(20/30)与上述研究中的差异无统计学意义(χ2=0.299,P>0.05);本研究中四环素的耐药率为63.33%(19/30)与上述研究中的差异无统计学意义(χ2=0.237,P>0.05);本研究中萘啶酸的耐药率33.33%(10/30)远低于上述研究,且差异有统计学意义(χ2=8.480,P<0.05)。这提示在后续对沙门菌展开的耐药监测中应持续对萘啶酸展开监测,以进一步掌握其耐药率变化趋势。对30株沙门菌进行聚类分析,得到29种PFGE带型,各带型之间相似度为49.5%~100.0%。PFGE带型呈现多样性,没有明显的优势带型,说明河南省食源性沙门菌存在高度散发的流行特征。

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